人工種植野生藥材的關鍵技術(中藥現(xiàn)代化系列7)
1.野生變家種、家養(yǎng)
實現(xiàn)野生藥材的人工繁育是實現(xiàn)瀕危藥材生產(chǎn)、滿足藥用的最重要途徑。其基本做法是在與野生藥材生態(tài)環(huán)境相似的地區(qū),按照藥用植物、藥用動物生長習性及對生態(tài)環(huán)境的要求,創(chuàng)造其生長發(fā)育和繁殖的合適條件,應用采自野生環(huán)境或人工繁育的繁殖材料,實現(xiàn)人工控制條件下生長,并在適當?shù)纳L年齡和生長季節(jié),采用合適的方法進行采收和產(chǎn)地初加工。該方法已廣泛應用于瀕危藥材的繁育,近百種野生藥材人工種植取得了成功。其中數(shù)項專門技術近年形成并得到了較好發(fā)展。
1.寄生植物人工接種技術
寄生植物是指一類不含葉綠素或含葉綠素很少,不能制造或部分制造養(yǎng)分,完全或部分靠吸取寄主植物的養(yǎng)分和水分進行生長的植物。中藥中有多種植物屬于寄生植物,如肉蓯蓉、鎖陽、列當、菟絲子、桑寄生、槲寄生等。寄生植物由于其生長方式的特殊性,不僅自然繁殖能力很弱,而且人工種植的難度也很大。
以肉蓯蓉為例,通過研究發(fā)現(xiàn)肉蓯蓉種子能夠誘導寄主根產(chǎn)生毛狀根,并向肉蓯蓉種子方向生長,同時,寄主根產(chǎn)生的信號物質(zhì)誘導肉蓯蓉種子萌發(fā),并形成約5mm長的吸器,只要肉蓯蓉種子撒在寄主根附近就能夠接種。同時,發(fā)現(xiàn)肉蓯蓉種子需要低溫層積才能萌發(fā),并發(fā)現(xiàn)了肉蓯蓉種子萌發(fā)誘導物質(zhì)氟啶酮,有效解決了肉蓯蓉種子的接種問題。
針對寄主植物老化,接種率明顯下降的問題,發(fā)明了斷根接種法,解決了成年或老化寄主植物的接種問題。針對南疆地區(qū)管花肉蓯蓉冬季低溫發(fā)生凍害問題,推廣淺種秋采,邊采挖、邊補種的技術,不僅解決了凍害問題,而且提高了肉蓯蓉的產(chǎn)量。
2.誘導型藥用植物藥材誘導理論和技術
有一類藥用植物,藥用有效成分在植株正常生長發(fā)育過程中不形成或很難形成,需受到外界生物或非生物脅迫植株才啟動生物合成,最為典型的是珍稀名貴南藥沉香,以及龍血竭、降香、檀香、安息香等珍稀瀕危南藥。
沉香的研究中,在原創(chuàng)性解析了“傷害誘導白木香防御反應形成沉香”機制基礎上,借鑒林木上采用輸液法給樹木輸送營養(yǎng)液促進樹木生長的方法,將之轉(zhuǎn)變給白木香輸導傷害刺激液,優(yōu)化出高效、安全結香液配方,可刺激誘導樹木啟動自身防御反應,誘導整棵樹內(nèi)部持續(xù)自然產(chǎn)香,發(fā)明了世界領先的“通體結香技術”,并已實現(xiàn)技術標準化、產(chǎn)業(yè)化;同時,誘導理論與方法也成功用于珍稀南藥降香心材誘導,發(fā)明了降香心材整體形成技術。
創(chuàng)新建立的傷害誘導防御反應結香理論及通體結香技術,對解決多種南藥資源瀕危困擾臨床供應,以及一些世界性瀕危藥用植物資源持續(xù)利用有重大理論和應用價值。
3.動物藥材野生變家種、家養(yǎng)技術
動物藥材野生變家種、家養(yǎng)技術包括養(yǎng)麝取香、人工養(yǎng)殖水蛭、人工養(yǎng)殖蟾蜍、現(xiàn)代新型養(yǎng)熊引流熊膽等。其中養(yǎng)熊引流熊膽曾有很大的爭議,我們主張“要熊膽更要人道”。熊膽應用歷史悠久,目前尚不可替代,養(yǎng)殖熊通過現(xiàn)代新型膽囊造瘺引流獲取膽汁為人類防治疾病發(fā)揮了重要作用,但人工引流熊膽不能用于生產(chǎn)保健品和化妝品,要積極開展替代品研究與開發(fā)。
2.野生撫育
如何提高栽培藥材質(zhì)量,使其與野生藥材相近,保證生產(chǎn)藥材的天然性,備受人們關注。中藥材野生撫育是野生藥材采集與藥材栽培的有機結合,是中藥材農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)經(jīng)營的新模式。根據(jù)動植物藥材生長特性及對生態(tài)環(huán)境條件的要求,在其原生或相類似的環(huán)境中,人為或自然增加種群數(shù)量,使其資源量達到能為人們采集利用,并能繼續(xù)保持群落平衡的一種藥材生產(chǎn)方式,近年發(fā)展勢頭良好。已成為中藥材生態(tài)栽培的主要方式,包括藥用植物和藥用動物野生撫育。中藥材野生撫育的基本方式有:封禁、人工管理、人工補種、仿野生栽培等。
封禁指以封閉撫育區(qū)域、禁止采挖為基本手段,促進目標藥材種群的擴繁。即把野生目標藥材分布較為集中的地域通過各種措施封禁起來,借助藥材的天然下種或萌芽增加種群密度。封禁的措施有劃定區(qū)域、采用公示牌標示、人工看護、圍封等各種方式。典型藥材有甘草、麻黃的圍欄養(yǎng)護。
人工管理指在封禁基礎上,對野生藥材種群及其所在的生物群落或生長環(huán)境施加人為管理,創(chuàng)造有利條件,促進藥材種群生長和繁殖。人工管理措施因藥材不同而異,如五味子的育苗補栽、搭用天然架、修剪、人工輔助授粉及施肥、灌水、松土、防治病蟲害等,野生大葉白麻(羅布麻)的管理措施則有清除混生植物、滅茬更新等,刺五加采用間伐混交林的方式,冬蟲夏草采用寄主昆蟲接種等。
人工補種指在封禁基礎上,根據(jù)野生藥材的繁殖方式、繁殖方法,在藥材原生地人工栽種種苗或播種,人為增加藥材種群數(shù)量。如野生黃芪撫育采取人工撒播栽培繁育的種子,刺五加采用帶根移栽等。
仿野生栽培指在基本沒有野生目標藥材分布的原生環(huán)境或相類似的天然環(huán)境中,完全采用人工種植的方式,培育和繁殖目標藥材種群。仿野生栽培時,藥材在近乎野生的環(huán)境中生長,不同于中藥材的間作或套種,如林下栽培人參、天麻、石斛等。
3.生物技術
利用現(xiàn)代生物技術實現(xiàn)中藥資源的有效保護和可持續(xù)利用已成為瀕危藥材生產(chǎn)的重要手段之一,其中產(chǎn)業(yè)化應用最為成功的是以鐵皮石斛組織培養(yǎng)為代表的快繁技術。
1.植物細胞工程與中藥資源再生
我國藥用植物組織培養(yǎng)工作始于20世紀60年代中期,發(fā)展于70—80年代。紅豆杉、鐵皮石斛、金線蓮等珍稀藥用植物的快速繁殖或脫毒組織培養(yǎng)。從20世紀80年代末以來,我國藥用植物細胞工程研究從篩選高產(chǎn)組織或細胞系、優(yōu)化培養(yǎng)條件以期降低成本及提高次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)量,過渡到了對次生代謝產(chǎn)物生物合成途徑的調(diào)控,已建立了紫草、三尖杉、甘草、紅豆杉等藥用植物細胞的液體培養(yǎng)系統(tǒng)。
2.毛狀根培養(yǎng)與藥用植物次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)
藥用植物本身就是產(chǎn)生一些有價值的次生代謝產(chǎn)物的載體,其中以Ri質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的毛狀根培養(yǎng)最受關注。通過發(fā)根農(nóng)桿菌侵染藥用植物細胞后將其自身攜帶的Ri質(zhì)粒上T-DNA基因轉(zhuǎn)移并整合進入藥用植物細胞基因組當中,從而誘導藥用植物細胞產(chǎn)生大量被稱為毛狀根的不定根。由于毛狀根具有激素自養(yǎng)、生長迅速、生長周期短等特點,同時由于它是分化程度很高的器官培養(yǎng)物,所以代謝通路的表達比較完整,活性物質(zhì)的高效合成較為穩(wěn)定。短葉紅豆杉、商陸、長春花等建立了相應的體系。
3.中藥發(fā)酵技術
以中草藥發(fā)酵生產(chǎn)藥物的起步相對較晚,20世紀80年代研究主要集中在真菌類自身發(fā)酵產(chǎn)生次生代謝物,如靈芝菌絲體、冬蟲夏草菌絲體發(fā)酵等。多為單一發(fā)酵,方式有固體發(fā)酵和液體發(fā)酵之分。云芝、蜜環(huán)菌等采取固體發(fā)酵方式生產(chǎn)。液體發(fā)酵技術是在抗生素工業(yè)發(fā)展起來后才運用到藥用真菌發(fā)酵中的,具有可進行工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)、規(guī)模大、產(chǎn)量高、發(fā)酵周期短和生產(chǎn)效益高等優(yōu)點。
4.酶工程技術
通過酶工程技術在溫和條件下對藥效成分進行高選擇性轉(zhuǎn)化,不僅能克服工業(yè)常用提取方法中提取率低、工序復雜等問題,還能提高提取體系的澄清度、改變藥材質(zhì)地,同時利用酶作為生物催化劑,可對中藥化學成分進行生物轉(zhuǎn)化,修飾其結構或活性位點,從而獲得新活性化合物。如工業(yè)生產(chǎn)薯蕷皂苷元自然發(fā)酵體系中加入纖維素酶、果膠酶、苦杏仁酶和葡萄糖苷酶,可多獲得25%的薯蕷皂苷元。
4.人工合成
在對中藥材活性成分充分研究的基礎上,利用從自然或人工合成的化學物質(zhì),采用一定的比例,運用合適的工藝程序合成與天然藥材活性部位相似的藥材方法。該方法已有大量的研究和實踐,其中應用最成功的是人工麝香的研發(fā)和生產(chǎn),以及體外培育牛黃的生產(chǎn)。