級(jí)別	超純、高純
含量	95
品牌	泛博
型號(hào)	CCK

Cell Counting Kit（CCK試劑盒）

目錄號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	包裝
025	Cell Counting Kit（CCK試劑盒）	100次	1mL
026	Cell Counting Kit（CCK試劑盒）	500次	5mL
027	Cell Counting Kit（CCK試劑盒）	1000次	10mL
028	Cell Counting Kit（CCK試劑盒）	3000次	30mL

 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：Cell Counting Kit簡(jiǎn)稱CCK 試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。 CCK法與普通的MTT法相比，具有顯著特點(diǎn)：★靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好★操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力★水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞★無(wú)需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對(duì)細(xì)胞毒性低★為1瓶溶液，不需要預(yù)制，即開(kāi)即用★適合于高通量藥物篩選 CCK用途：藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn) 操作說(shuō)明：一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）1、先用**計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。2、按比例（例如：1/2比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。3、接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加CCK試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X軸），OD值為縱坐標(biāo)（Y軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時(shí)間。）二、細(xì)胞活性檢測(cè)1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100ul/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,5% CO2的條件下）。2、向每孔加入10 ul的CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4、用**測(cè)定在450nm處的吸光度。5、如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10 ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。三、細(xì)胞增值-毒性檢測(cè)1、在96孔板中配置100ul的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（在37℃,5% CO2的條件下）。2、向培養(yǎng)板加入10ul不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。4、想每孔加入10ul CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。6、用**測(cè)定在450nm處的吸光度。7、如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10 ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
 備注：
①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入CCK試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁(yè)面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾OD值讀數(shù)。
③白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
④當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μl 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μl 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。
⑤如果沒(méi)有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測(cè)靈敏度**高。⑥培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。 活力計(jì)算：細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細(xì)胞、CCK溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力 保存條件：4℃避光保存一年有效